安化黑茶是采用湖南雪峰山脈茶區(qū)大中葉群體品種的鮮葉，經(jīng)過(guò)殺青、揉捻、渥堆、松柴明火干燥等四大工藝加工而成，具有色澤黑褐油潤(rùn)，滋味醇和或微澀，湯色紅明艷亮，略帶獨(dú)特松煙香品質(zhì)特征的毛茶及以其為原料蒸壓成形的緊壓茶總稱(chēng)。
安化黑茶具有多種對(duì)人體有益的保健功能，而這些生理保健功效主要是由茶多酚、茶多糖及茶色素等起著主要作用。安化黑茶的生理保健功能被人們所熟知，例如抗氧化、清除氧自由基、降脂、調(diào)節(jié)脂代謝、降糖、調(diào)節(jié)糖代謝、保護(hù)心血管、抗腫瘤作用、抗菌抑菌作用等生理活性功能。
最新研究報(bào)道，安化黑茶提取物有可能還具有生理抗炎的作用，但是具體作用機(jī)理機(jī)制暫時(shí)處于初級(jí)研究階段。炎癥性腸病(inflammatory bowel diseases，IBD)，廣義的解釋包括各種的腸道炎性疾病，一般來(lái)說(shuō)是累及回腸、直腸、結(jié)腸這些的都可以稱(chēng)作炎癥性腸病，它的表現(xiàn)一般都是腹瀉、腹痛，甚至有些人可以出現(xiàn)血便的癥狀。炎癥性腸病主要包括,潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)和克羅恩病。潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種能夠致使直腸和/或結(jié)腸發(fā)炎并可以伴隨潰瘍的疾病，具體發(fā)病原因還不明確，但已有研究證實(shí)促炎和抗炎細(xì)胞因子的分泌失衡，在UC發(fā)病及病情發(fā)展中產(chǎn)生著重要的作用。
通過(guò)建立葡聚糖硫酸鈉(dextran sulphate sodium,DSS)誘導(dǎo)的ICR小鼠結(jié)腸炎模型，探討安化黑茶對(duì)腸炎的潛在保護(hù)作用及分子機(jī)理研究，為功能性食品的開(kāi)發(fā)提供科學(xué)的理論基礎(chǔ)。安化黑茶對(duì)DSS誘導(dǎo)ICR小鼠結(jié)腸炎的抑制作用ICR小鼠連續(xù)飲用3%DSS 7 d誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎，用安化黑茶提取物灌胃，評(píng)估安化黑茶的抗炎作用。實(shí)驗(yàn)中可以觀察到DSS組小鼠體重減輕明顯，毛色暗淡，精神萎靡，其排泄物肉眼可見(jiàn)血性粘液，腹瀉癥狀嚴(yán)重，與空白組小鼠DAI評(píng)分相比，DSS組小鼠DAI評(píng)分明顯提高(p<0.01)。實(shí)驗(yàn)小鼠灌胃安化黑茶提取物后，可以觀察到上述病癥得到明顯的緩解。與DSS損傷組相比，高劑量安化黑茶提取物和低劑量安化黑茶提取物組的小鼠均能緩解ICR小鼠體重的下降，降低糞便隱血發(fā)生率，減少腹瀉次數(shù)，且高劑量濃度安化黑茶提取物組作用效果更加明顯。DSS組小鼠結(jié)腸腸壁明顯增厚,腸粘膜出現(xiàn)嚴(yán)重的充血、水腫；相對(duì)于對(duì)照組，小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度明顯縮短(P<0.01)；相對(duì)于對(duì)照組，髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)和丙二醛(malonaldehyde，MDA)活性明顯增高，而安化黑茶提取物灌胃的兩個(gè)濃度組小鼠MPO和丙二醛濃度明顯下調(diào)(p<0.01)；同時(shí)，安化黑茶提取物灌胃小鼠結(jié)腸壁未有明確增厚和結(jié)腸黏膜充血癥狀得到有效的改善。
安化黑茶可以改善潰瘍性結(jié)腸炎小鼠免疫系統(tǒng)紊亂，降低結(jié)腸組織中MPO和MPO的含量，減少小鼠結(jié)腸炎癥組織的損傷。相對(duì)于對(duì)照組小鼠，DSS組小鼠結(jié)腸組織炎癥因子TNF-α、IL-lβ和IFN-y mRNA的相對(duì)表達(dá)水平明升上升，而補(bǔ)充安化黑茶提取組小鼠結(jié)腸這些炎癥因子則受到明顯抑制；采Western blot技術(shù)分析小鼠結(jié)腸炎癥因子蛋白表達(dá)水平，其結(jié)果與RT-qPCR技術(shù)分析結(jié)果基本一致;進(jìn)一步采用免疫組化技術(shù)，確定補(bǔ)充安化黑茶提取組小鼠結(jié)腸組織炎癥因子表達(dá)下降，提示安化黑茶能抑制DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎癥組織炎癥因子的表達(dá)。安化黑茶抑制LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的炎癥及炎癥因子表達(dá)巨噬細(xì)胞RAW264.7在脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激的炎癥體外模型,采用安化黑茶提取物處理，在細(xì)胞水平確定其是否具有抗炎作用及可能的分子機(jī)理。安化黑茶對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞毒性影響。不同濃度的安化黑茶提取物處理RAW264.7細(xì)胞24 h后，發(fā)現(xiàn)各組細(xì)胞數(shù)量排列密集，形狀呈梭狀，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，細(xì)胞狀態(tài)無(wú)明顯差異。采用MTS法檢測(cè)對(duì)照組，安化黑茶組OD值之間無(wú)顯著差異(p>0.05)。說(shuō)明0～100μg/mL范圍內(nèi)，安化黑茶提取物對(duì)RAW264.7細(xì)胞無(wú)明顯的細(xì)胞毒性，對(duì)其生長(zhǎng)、狀態(tài)及活性無(wú)影響，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。安化黑茶對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的影響。分別采用RT-qPCR和Western blot比較各組細(xì)胞炎癥基因表達(dá)差異。相對(duì)于對(duì)照組，LPS組細(xì)胞促炎因子TNF-α、IL-1β和IFN-γ的mRNA表達(dá)量和蛋白表達(dá)明顯上升；相對(duì)于LPS組，安化黑茶提取物能夠明顯降低炎癥因子的表達(dá)，且呈明顯的量效關(guān)系。安化黑茶對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄活性的影響。核轉(zhuǎn)錄因子(nuclear transcription factor-KB，NF-κB/p65)是調(diào)控炎癥因子表達(dá)的重要轉(zhuǎn)錄因子，TNF-α、IL-1β和IFN-γ基因啟動(dòng)子區(qū)域均存在一個(gè)或多個(gè)NF-κB的結(jié)合位點(diǎn)。分別利用熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)，研究安化黑茶對(duì)NF-κB活性的影響。
? ? 結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與對(duì)照組相比，LPS誘導(dǎo)組細(xì)胞NF-κB相對(duì)熒光素酶活性(relative fluorescence intensity，RLU)顯著升高；而安化黑茶提取物組細(xì)胞中RLU值顯著減少，呈劑量依賴(lài)性，提示安化黑茶提取物可能通過(guò)抑制NF-κB的活性，從而抑制炎癥因子表達(dá)。
安化黑茶提取物對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎癥具有抑制作用，它能明顯改善小鼠的炎癥癥狀；安化黑茶提取物能下調(diào)關(guān)鍵炎癥因子TNF-α、IL-lβ和IFN-γ的表達(dá)，其作用的分子機(jī)理可能與安化黑茶提取物抑制NF-κB的活性相關(guān)。
資料來(lái)源：中南林業(yè)科技大學(xué)碩士學(xué)位論文
