茶樹（Camellia sinensis）是山茶科（Theaceae）山茶屬（Camellia）的一種具有重要經(jīng)濟價值的多年生木本植物，我國是世界上最大的茶葉生產(chǎn)國和消費國，國內(nèi)茶樹種植主要分布在南部20多個省。其中，福建是我國重要的產(chǎn)茶大省，2020年福建茶園面積為22.93萬公頃，茶產(chǎn)量46.14萬噸，綜合產(chǎn)值達1 300億元。隨著茶樹種植規(guī)模的不斷擴大，茶樹上病蟲害的發(fā)生和危害也逐漸增多，給茶葉的產(chǎn)量和品質(zhì)造成了不同程度的影響。病毒病是近年來茶樹上新報道的一種病害，為防止病毒病的進一步擴散和蔓延，加強茶樹病毒種類、分布及快速檢測技術研究具有十分重要的現(xiàn)實意義。
近期，福建農(nóng)林大學植物病毒研究所聯(lián)合福州海關技術中心/福建省檢驗檢疫技術研究重點實驗室、榕城海關綜合技術服務中心完成的題為“福建省茶樹病毒種類鑒定及多重PCR檢測技術的建立”的研究在《中國農(nóng)業(yè)科學》2024年第57卷4期正式發(fā)表。
2019-2023年，從福建省福州、南平、寧德、泉州、漳州、廈門、三明、莆田和龍巖9個地市區(qū)采集具有褪綠、皺縮和壞死等疑似病毒感染癥狀的茶樹樣品1 869份，采用高通量測序技術結(jié)合PCR和RT-PCR檢測的方法對茶樹病毒病的病原進行鑒定，并將PCR擴增獲得的特異性目的片段進行克隆和測序，對獲得的序列進行系統(tǒng)發(fā)育分析;同時，根據(jù)GenBank上已報道的病毒序列設計特異性引物，通過退火溫度、引物濃度、循環(huán)數(shù)等反應條件和反應程序的優(yōu)化，建立同時檢測福建茶樹主要病毒的多重PCR檢測技術，并測定該技術的特異性、靈敏度及實際應用效果。
茶樹病毒病主要癥狀
從所采集的茶樹病樣上檢出3種病毒，按檢出率從高到低依次為油茶雙生病毒（oil tea associated geminivirus，OTaGV）（48.90%）、茶樹壞死環(huán)斑病毒（tea plant necrotic ring blotch virus，TPNRBV）（26.75%）和茶樹潛隱病毒1（camellia cryptic virus 1，CCV1）（17.98%）;在檢出病毒的1 258份樣品中，有807份為OTaGV、TPNRBV或CCV1單獨侵染，檢出率分別為37.20%、21.38%和5.56%;其余451份樣品為2種或3種病毒復合侵染，復合侵染檢出率達35.85%，OTaGV+CCV1、TPNRBV+CCV1、TPNRBV+OTaGV、OTaGV+CCV1+TPNRBV 4種類型復合侵染檢出率分別為17.49%、0.40%、14.71%、3.26%。
在地理分布上，OTaGV在福州、南平、寧德、泉州、漳州、廈門、三明、莆田和龍巖9個地區(qū)均有分布，其中漳州OTaGV檢出率最高，為96.77%;CCV1在福州、南平、寧德、泉州、漳州、三明、莆田和龍巖8個地區(qū)均有分布，其中三明CCV1檢出率最高，為66.00%;TPNRBV在福州、南平、寧德、泉州和漳州5個地區(qū)均有分布，其中泉州TPNRBV檢出率最高，為79.13%;在福建省9個地區(qū)中，廈門地區(qū)僅檢出OTaGV，三明、莆田和龍巖地區(qū)檢出OTaGV和CCV1，其他5個地區(qū)同時檢出OTaGV、TPNRBV和CCV1;福州、南平、寧德、泉州、漳州、三明、莆田7個地區(qū)檢測到病毒復合侵染，其中漳州地區(qū)病毒復合侵染檢出率最高（85.00%）、寧德地區(qū)病毒復合侵染檢出率最低（23.03%）。
利用測定的CCV1和TPNRBV部分基因序列構建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果表明本研究獲得的CCV1分離物（FW）與已報道的福建分離物FJ-SH104（GenBank登錄號：ON807095）親緣關系最近、TPNRBV分離物（FU）與福建分離物QZHA92（GenBank登錄號：OQ948454）親緣關系最近。經(jīng)優(yōu)化建立的多重PCR檢測技術特異性強，僅OTaGV、TPNRBV和CCV1能擴增出特異性目的片段，而其他病毒及健康茶樹樣品上均未擴增出特異性目的片段;多重PCR靈敏度最低可以檢測到稀釋至10-4倍的OTaGV、TPNRBV和10-3倍的CCV1;利用該多重PCR檢測技術對茶園中采集的60份病樣進行檢測，檢測結(jié)果與單一PCR檢測結(jié)果完全相符。
多重PCR靈敏度
OTaGV、TPNRBV和CCV1是當前福建茶樹上主要病毒種類，其中OTaGV為福建地區(qū)首次報道，該病毒可侵染茶樹也為首次發(fā)現(xiàn);在檢出的3種病毒中，以OTaGV發(fā)生分布范圍最廣，其次為CCV1、TPNRBV;福建地區(qū)茶樹病毒目前仍以單獨侵染為主，但同時存在較多的復合侵染，復合侵染類型包括TPNRBV+CCV1、TPNRBV+OTaGV、CCV1+OTaGV和OTaGV+CCV1+TPNRBV;建立的多重PCR檢測技術特異性強、靈敏度高，可用于茶園茶樹上OTaGV、CCV1和TPNRBV 3種病毒的快速檢測。研究結(jié)果可為福建茶樹病毒病的綜合防控提供理論依據(jù)和技術支持。
該研究獲得福建省農(nóng)業(yè)引導性（重點）項目（2020N0024）、福建省檢驗檢疫技術研究重點實驗室開放課題（FJKF2019-03）的資助。
論文鏈接：
《福建省茶樹病毒種類鑒定及多重PCR檢測技術的建立》
引用本文：
陳細紅, 蔡偉, 虞赟, 李敏, 王念武, 杜振國, 沈建國, 高芳鑾. 福建省茶樹病毒種類鑒定及多重PCR檢測技術的建立[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學, 2024, 57(4): 698-710.
CHEN XiHong, CAI Wei, YU Yun, LI Min, WANG NianWu, DU ZhenGuo, SHEN JianGuo, GAO FangLuan. Identification of Tea Plant Viruses in Fujian Province and Establishment of Multiplex PCR Detection Assay[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2024, 57(4): 698-710.
來源：中國農(nóng)業(yè)科學 農(nóng)業(yè)科學微平臺，信息貴在分享，如涉及版權問題請聯(lián)系刪除
